Полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР) – це потужний та універсальний метод у молекулярній біології, що дозволяє збільшувати кількість конкретних ДНК-фрагментів у лабораторних умовах. Вона заснована на специфічній взаємодії ДНК речовин (ферментів) та заміщенні одного ланцюга ДНК іншим, компліментарним їй.
В основі ПЛР лежить кілька ключових компонентів. Перший компонент – це вихідна ДНК, з якої потрібно отримати велику кількість певного фрагмента. Другий компонент – це домішки реагентів, що включають ДНК-полімеразу, шаблонну ДНК, праймери, дезоксинуклеотидтрифосфати (дНТФ) та буферні розчини.
Процес ПЛР відбувається у кількох етапах. На першому етапі відбувається поділ двох ланцюгів вихідної ДНК при нагріванні, що дозволяє праймерам, обернено компліментарним ділянкам ДНК, зв'язатися з одним ланцюгом. Потім полімераза прикріплюється до праймерів, здійснює продовження ланцюга, синтезуючи нові нитки ДНК із дНТФ. І нарешті, на останньому етапі відбувається охолодження та поділ нових ДНК-ланцюгів, які після цього можна використовувати для подальших досліджень.
| Компонент | Функція |
|---|---|
| ДНК-шаблон | Відправна точка для синтезу нового ДНК-ланцюга |
| Олігонуклеотидні праймери | Потрібні для ініціації синтезу ДНК-ланцюгів |
| Термостабільна ДНК-полімераза | Каталізує синтез нових ДНК-ланцюгів |
| Дезоксирибонуклеозидтрифосфати (dNTP) | Будівельні блоки для синтезу нових ДНК-ланцюгів |
| Буферна суміш | Підтримує оптимальні умови для роботи ферментів |
| Шаблонна ДНК | Вихідний матеріал для аналізу методом ПЛР |
В основі методу ПЛР лежить багаторазове подвоєння певної ділянки ДНК за допомогою ферментів у штучних умовах (in vitro). Через війну напрацьовуються кількості ДНК, достатні візуальної детекції.
Які інфекції показує ПЛР?
Зміст:
Які інфекції дозволяє виявити мазок на ПЛР:
- герпес;
- хламідіоз статевих шляхів;
- папілома вірусна інфекція;
- уреплазмоз статевих органів;
- мікоплазмоз;
- гонорея;
- гарднерелла.
Який фермент грає основну роль ПЛР?
Ключовою ланкою у проведенні ПЛР-РВ є термостабільна ДНК-полімераза. Найчастіше використовується фермент із Thermus aquaticus, або Taq.
Які стадії включає ПЛР?
Як правило, кожен з циклів, що послідовно повторюються ПЛР складається з трьох етапів:
- денатурації, або «плавлення» ДНК, коли дволанцюжкова ДНК під дією високої температури переходить в одноланцюговий стан;
- зв'язування (відпалу) праймерів з матричною ДНК;
- елонгації, або подовження ланцюга.
Які компоненти потрібні для ПЛР?
Для проведення ПЛР у найпростішому випадку потрібні такі компоненти:
- ДНК-матриця, що містить ту ділянку ДНК, яку потрібно ампліфікувати;
- два праймери, комплементарні кінцям необхідного фрагмента;
- термостабільна ДНК-полімераза;
- дезоксинуклеотидтрифосфати (A, G, C, T);